Homozygotyczna mutacja CARD9 w rodzinie ze skłonnością do zakażeń grzybiczych ad

Zespół autoimmunologiczny zespołu polendokrynopatii-kandydozy i dystrofii ektodermalnej (APECED) jest spowodowany przez mutacje bialleliczne w AIRE, genie autoimmunologicznego regulatora. Heterozygotyczne mutacje w przetworniku sygnałowym i aktywatorze genu transkrypcji 3 (STAT3) powodują zespół hiper-IgE, inne zaburzenie wielonarządowe, w którym kandydoza jest powszechną cechą kliniczną17-20. Genetyczne powiązanie autosomalnego dominującego zespołu kandydozy-zapalenia tarczycy z chromosomem 2 zostało zgłoszone, 12 i kandydoza związana z niską ekspresją międzykomórkowej cząsteczki adhezyjnej (ICAM-1) została zidentyfikowana na chromosomie 11,21, ale w obu przypadkach geny sprawcze pozostają nieznane. Podjęliśmy badania genetyczne dużej, pokrewnej rodziny irańskiej z wieloma przypadkami przewlekłej kandydozy śluzówkowo-skórnej, aby ustalić, czy zmutowany gen jest związany z tą postacią kandydozy nie-dndromowej. Ostatnie prace wykazały, że wrodzona odporność przeciwgrzybicza u myszy jest kontrolowana przez szlak sygnałowy, który nie obejmuje receptorów pobudzających. Myszy bez receptora lektyny typu C dectin-1 (kodowanego przez gen Clec7a) lub wewnątrzkomórkowa cząsteczka adaptorowa Card9, która jest niezbędna do przekazywania sygnałów przez dektynę-1, mają upośledzoną odporność przeciwgrzybową.22,23
Zidentyfikowaliśmy homozygotyczną mutację w CARD9, która powoduje mutację powodującą utratę funkcji z powodu przedwczesnego kodonu stop w sekwencji kodującej. Eksperymenty w mysim modelu Card9 – / – pokazały, że tylko dzikiego typu CARD9 – a nie zmutowany ludzki gen CARD9 znaleziony u pacjentów – może przywrócić wytwarzanie cytokin w odpowiedzi na wyzwalanie dectin-1, receptora rozpoznawania wzorców dla komórek grzybowych- antygeny ścienne.
Metody
Uczestnicy badania
W badaniu wzięliśmy udział 36 członków dużej, spokrewnionej z Iranem rodziny. Próbki krwi zostały pobrane do analizy DNA, a uczestnicy zostali sklasyfikowani jako prawdopodobnie dotknięci lub prawdopodobnie nie dotknięci skutkami badania fizykalnego i kultury mikrobiologicznej. Pracownicy laboratorium nie byli świadomi klasyfikacji próbek. Uczestnicy wyrazili pisemną zgodę na formularzach zatwierdzonych przez lokalne komisje etyczne. Do kontroli wykorzystano próbki DNA od 50 zdrowych darczyńców z Iranu i 180 zdrowych białych dawców innych narodowości.
Genotypowanie i analiza
Próbki DNA pochodzące od pięciu członków rodziny uznanych za prawdopodobnie dotknięte, a osiem osób, które prawdopodobnie nie uległy zmianie, genotypowano przy użyciu macierzy mapowania pojedynczego nukleotydu polimorfizmu (SNP) Affymetrix 250k, jak opisano wcześniej.24 Genotypy macierzy SNP zostały przypisane za pomocą metody Bayesian Robust Linear Modeling i Mahalanobis (BRLMM), która została zaimplementowana zgodnie z opisem w oprogramowaniu Genotyping Console i wprowadzona jako udoskonalenie metody RLMM.25
W celu dalszej oceny jednego regionu na chromosomie 9, który sugerował powiązanie, cztery markery mikrosatelitarne zostały genotypowane na 13 dostępnych próbkach, jak opisano wcześniej26. Wyniki pojedynczego markera lod zostały obliczone za pomocą Fastlink27-29; Wyniki w punktach wielopunktowych zostały obliczone za pomocą Superlink.30,31 (Szczegółowe informacje na temat użycia metody BRLMM, Fastlink i Superlink znajdują się w dodatkowym dodatku, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie.)
Genetyka molekularna i fenotypowanie komórek T
DNA z uczestników badania wyizolowano i kodujące regiony CARD9 (Ensembl number, ENSG00000187796) amplifikowano i sekwencjonowano
[hasła pokrewne: ślepa próba, lekarstwo z orzecha włoskiego, kreatynina cena badania ]